01

臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)導(dǎo)管室的設(shè)計(jì)

(1)臨床基因擴(kuò)增檢測導(dǎo)管室的區(qū)域設(shè)計(jì)原則。手術(shù)室凈化采用空氣潔凈技術(shù)對微生物污染采取程度不同的控制，達(dá)到控制空間環(huán)境中空氣潔凈度適于各類手術(shù)之要求；并提供適宜的溫、濕度，創(chuàng)造一個(gè)潔凈舒適的手術(shù)空間環(huán)境。醫(yī)院凈化工程不同級別的層流手術(shù)室其空氣潔凈度標(biāo)準(zhǔn)不同，例如國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)I級層流手術(shù)室的標(biāo)準(zhǔn)為潔凈度5級，每立方尺空氣中≥0.5μm的塵粒數(shù)，≤100顆或每升空氣中≤3.5 顆。II級層流手術(shù)室的標(biāo)準(zhǔn)為潔凈度6級，每立方尺空氣中≥0.5μm的塵粒數(shù)，≤1000顆或每升空氣中≤35顆。手術(shù)室凈化廠家除了具備一般手術(shù)室常規(guī)器械外，應(yīng)有閉路電視、空調(diào)、高級電刀（進(jìn)口），為保證不因意外停電影響手術(shù)，醫(yī)院應(yīng)備有發(fā)電設(shè)施。不使手術(shù)室地面污染，最好使用交換車等現(xiàn)代推車。

 原則上進(jìn)行臨床研究基因技術(shù)擴(kuò)增檢驗(yàn)導(dǎo)管室應(yīng)當(dāng)可以設(shè)置具有以下工作區(qū)域：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)分析區(qū)。這 4 個(gè)區(qū)域在物理學(xué)習(xí)空間上必須是完全沒有相互影響?yīng)毩⒌?，各區(qū)域無論是在空間上還是在使用中，應(yīng)當(dāng)能夠始終都是處于一個(gè)完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。根據(jù)學(xué)生使用電子儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。例如我們使用情況實(shí)時(shí)熒光 PCR 儀，擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物數(shù)據(jù)分析區(qū)可合并；采用不同樣本企業(yè)處理、核酸提取及擴(kuò)增目標(biāo)檢測為一體的自動(dòng)化分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物主要分析區(qū)可合并。各區(qū)的功能是：

1.試劑進(jìn)行儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：貯存實(shí)驗(yàn)試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增技術(shù)反應(yīng)體系混合液的準(zhǔn)備，以及一個(gè)離心管、吸頭等生活消耗品的貯存和準(zhǔn)備。

2.樣品制備區(qū)：核酸（RNA、DNA）提取、儲(chǔ)存、加入擴(kuò)增反應(yīng)管。 涉及臨床樣本的作業(yè)，應(yīng)符合生物安全二級導(dǎo)管室防護(hù)設(shè)備、個(gè)人防護(hù)、操作規(guī)范的要求。

3.擴(kuò)增區(qū)域: cdna 合成，擴(kuò)增和檢測。

4.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):對擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析和測定，如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測序等。

（二）臨床研究基因進(jìn)行擴(kuò)增技術(shù)檢驗(yàn)導(dǎo)管室的空氣流向。

可根據(jù)標(biāo)本制備區(qū)的試劑存儲(chǔ)和制備區(qū)，對導(dǎo)管室的氣流進(jìn)行臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)，防止擴(kuò)增產(chǎn)物跟隨氣流進(jìn)入預(yù)擴(kuò)增區(qū)?？筛鶕?jù)試劑儲(chǔ)存區(qū)標(biāo)本制備區(qū)放大區(qū)的氣壓進(jìn)行。它可以通過安裝排風(fēng)機(jī)、負(fù)壓排氣裝置或其他可行的方式來實(shí)現(xiàn)。

（>3）工作區(qū)儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)。

1.試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)

 冰箱（1）2～8 ℃，-20 ℃ 以下。

（2）混勻器。

（3）微采樣器（覆蓋0.2-1000l）

  (4)可移動(dòng)紫外線燈(靠近工作臺(tái))。

（5）耗材：一次性手套、耐高壓離心管、原型吸頭。

（6）專用工作服和工作鞋(套)。

（7）專用網(wǎng)絡(luò)辦公生活用品。

 2.標(biāo)本制備區(qū)

（1）2-8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱。

（2）高速離心機(jī)。

（3）混勻器。

  (4)水浴槽或加熱模塊。

  (5)微量取樣器(覆蓋0.2-1000微升)

（6）可移動(dòng)進(jìn)行紫外燈（近工作就是臺(tái)面） 。

（7）生物安全柜。